南方墨點法(southern blot)

有鑑於阮列有一點點不負責任，我們只能默默地收拾殘局…啊不是，是深入研究

南方墨點法(southern blot)

目的：偵測經由膠體電泳分離後，含有特定序列的去氧核醣核酸片段

基本原理：

利用標定的「探針」，與轉印模上的標靶DNA進行雜交，檢測標靶DNA是否具有與探針同源的序列。探針加入到印模後會與標靶DNA用氫鍵緊密相接，其餘的探針便會被洗去，由此可知標靶DNA中那些與探針為互補片段。

[探針：單股小段DNA序列，製作方法為：加熱雙股DNA使為單股片段，再加入放射性同位素、螢光、或由酶修飾，成為探針]

基本過程

<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->從組織中反覆抽取蛋白質並從中製取基因組DNA(gDNA)

<!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->限制酶切割gDNA

<!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->將切割產物進行膠體電泳

[此處會在電泳完成後進行DNA變性處理]

<!--[if !supportLists]-->4. <!--[endif]-->以毛細轉印或電轉印固定於NC膜(硝酸纖維膜)或尼龍膜並固定DNA

[毛細轉印：早期使用，利用毛細現象轉印]

[電轉印：改良後廣泛使用，利用電轉印儀將陰極凝膠面轉印製陽極膜面]

[以上摘自wikipedia，請自行深入了解]

<!--[if !supportLists]-->5. <!--[endif]-->在膜上與探針雜交

<!--[if !supportLists]-->6. <!--[endif]-->洗膜(洗去未鍵結探針)並檢測結果

影響雜交因素

<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->標靶DNA的濃度及長度：濃度越大越敏感、分子越大越不敏感

<!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->探針性質

<!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->雜交液體積、溫度、雜交時間

<!--[if !supportLists]-->4. <!--[endif]-->雜交液的離子強度

<!--[if !supportLists]-->5. <!--[endif]-->非特異性雜交反映

<!--[if !supportLists]-->6. <!--[endif]-->漂洗方法

<!--[if !supportLists]-->7. <!--[endif]-->固相膜的特性

應用：[暫時從缺，作者正在找資料…]

以上摘自wikipedia

[轉印示意圖][轉載自wiki]